研究目的

  溶血磷脂酸为一种与肝纤维化有关的脂质介质。水飞蓟素和咖啡因是具有抗炎和抗氧化作用的天然化合物。本研究旨在探讨水飞蓟素、咖啡因及其组合对硫代乙酰胺（TAA）所诱导肝纤维化中溶血磷脂酸受体1（LPAR1）途径的影响。

研究方法

  对雄性Sprague-Dawley大鼠 以200 mg/kg剂量腹腔注射TAA，每周2次，持续8周，以诱导肝纤维化。水飞蓟素（50 mg / kg），咖啡因（50 mg / kg）或其组合（50 mg / kg水飞蓟素+ 50mg / kg咖啡因）每天给予大鼠口服，持续8周，同时注射TAA。通过检测肝功能、肝组织的病理学检查评估大鼠肝脏情况。 通过RT-PCR检测LPAR1、转化生长因子β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）和α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）的mRNA表达。应用免疫组化法对LPAR1的组织表达进行评分。

研究发现

  水飞蓟素、咖啡因及其组合可显着改善肝功能。可显著降低肝的纤维化及坏死性炎症评分。与单用水飞蓟素或咖啡因治疗相比，水飞蓟素和咖啡因的组合治疗，大鼠的坏死性炎症评分显著降低。此外，水飞蓟素，咖啡因及其组合可显著降低肝脏LPAR1，TGF-β1，CTGF和α-SMA基因表达和LPAR1组织表达。

TAA 硫代乙酰胺；Sily 水飞蓟素 ；Caff 咖啡因

ACTA 2：小鼠大动脉平滑肌肌动蛋白α2; CTGF：结缔组织生长因子; HRPT1：次黄嘌呤-鸟嘌呤磷酸核糖转移酶; LPAR 1：溶血磷脂酸受体1; TGF-β1：转化生长因子β1。

图 1 水飞蓟素、咖啡因及其组合可改善肝功能

动物组正常，TAA（硫代乙酰胺200 mg / kg，每周两次，共8周），Sily（每天水飞蓟素50mg / kg + TAA 200 mg / kg，每周2次，共8周），caff（每日咖啡因50mg/ kg + TAA 200mg / kg，每周两次，共8周），sily + caff组（水飞蓟素+咖啡因组合+ TAA 200mg / kg，每周2次，共8周）。通过血清白蛋白（A），总蛋白（B），ALT（C），AST（D）和总胆红素（E）水平分析肝功能。条形图代表平均值±SE。，P <0.05；*，P <0.005，相对于各组。

图2 水飞蓟素，咖啡因及其组合可改善肝坏死性炎症反应并降低纤维化评分

通过坏死性炎症评分（A）和纤维化评分（B）来分析肝组织病理学。 条形代表平均值±SE。 **， P <0.005，相对于各组。

图3 病理图示，水飞蓟素、咖啡因及其组合可改善肝脏坏死性炎症，胶原沉积和纤维化

单独使用水飞蓟素或咖啡因治疗显示坏死性炎症变化减少（A，苏木精-伊红染色），胶原沉积和纤维化减少 （B，Masson三色染色）。 水飞蓟素或咖啡因联合治疗显示，与对照大鼠相比坏死性炎症和纤维化的显着改善。 箭头表示炎症和纤维化区域。CV：中央静脉，PT：门静脉

图4 水飞蓟素、咖啡因及其组合可下调肝溶血磷脂酸受体1（LPAR1）的表达

应用RT-PCR（A）检测肝LPAR1 mRNA基因表达，使用免疫组化（B，C）检测肝LPAR1蛋白表达。 条形代表平均值±SE。 **， P <0.005，相对于各组。 箭头表示LPAR1的细胞内蛋白质表达。

图5 水飞蓟素，咖啡因及其组合降低了肝内TGF-β1，CTGF和α-SMA基因表达

应用RT-PCR分析肝内TGF-β1（A），CTGF（B）和α-SMA（C）的基因表达。 条形图代表平均值±SE。 ，P <0.05; *，P <0.005，与各组相比。

α- SMA：α平滑肌肌动蛋白; ALT：丙氨酸氨基转移酶; AST：天冬氨酸氨基转移酶; CTGF：结缔组织生长因子; LPAR1：溶血磷脂酸受体1; TGF-β1：转化生长因子β1。 ** P <0.005，相关性显著。